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產品中心
- 產品參數
- 貨號： P1018
- 商品名稱： RIPA裂解液（中）
- 規格： 100ml
- 價格： ￥180
RIPA裂解液（中）
【產品簡介】
RIPA裂解液是一種傳統的細胞組織快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣 品可以用于常規的PAGE、Western、免疫沉淀、免疫共沉淀和ELISA等。
【貨 號】 P1018
【規 格】 100ml/瓶
【保存條件】 -20℃保存，有效期為1年。
【使用說明】
1.本產品是一款傳統的細胞組織裂解液，該緩沖液與許多應用相容包括SDS-PAGE,western blot，免疫沉淀和ELISA等。
2. 本產品的主要成分1%NP-40 ,0.5% Sodium deoxycholate,0.1% SDS以及含有EDTA,sodium fluoride,sodium orthovanadat等抑制劑，可以有效裂解蛋白樣品，所有步驟都需要在冰上進行。
3. 裂解得到的蛋白樣品，含有較高濃度的去垢劑，不建議用 Bradford 法測定蛋白濃度，可 以選用 BCA 蛋白定量試劑盒測定蛋白濃度。
對于培養細胞樣品：
溶液在使用前數分鐘內加入相應量的PMSF，使PMSF的最終濃度為1mM或者根據實驗需要加入 適當的蛋白磷酸酶抑制劑混合物。
貼壁細胞：計數后去除培養液，細胞刮收集細胞，200g離心5min，用PBS、生理鹽水清洗多次。 按照2×10 6細胞約6孔板每孔加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數下，使裂解液和細胞充分接觸。置于冰上，于搖床上裂解30分鐘。
懸浮細胞：
離心收集細胞，輕輕vortex或者彈擊管底以把細胞盡量分散開。按照5×10 5細胞數每 孔加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液充分裂解細胞。裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。
可根據需要進行超聲裂解，充分裂解后，10000-14000g 4℃離心10分鐘，取上清，即為蛋白提取物，可進行后續操作。
對于組織樣品：
a. 把組織放于預冷的PBS或生理鹽水中漂洗數次，將組織剪切成細小的組織碎片。對于心臟，腎臟等含血量豐富的應多次洗滌，確保無血液干擾。
b. 取適當量的裂解液，在使用前數分鐘內加入PMSF，使PMSF的最終濃度為lmM，或者根據實驗需要加入適當的蛋白酶磷酸酶抑制劑混合物。
c. 稱量組織，按照每20毫克組織加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液，即組織凈重（mg）： 裂解液（ul）=1:10的比例，然后立即進行勻漿。用玻璃勻漿器快速勻漿，直至肉眼觀察無明 顯組織塊，然后再冰上裂解30分鐘左右，直至充分裂解。也可以把組織樣品冷凍后液氮研磨， 研磨充分后加入裂解液進行裂解。 d. 充分裂解后，10000-14000g 4℃ 離心5-10分鐘，取上清，即可進行后續蛋白分析等操作
【注意事項】
1.裂解樣品的所有步驟都需要在冰上進行。
2.為了取得最佳的使用效果，盡量避免反復凍融，建議分裝保存使用
3.為了您的身體安全及健康，請穿實驗服及佩戴一次性手套操作。
4.本產品僅限于科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。
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